آزمایش بیوره جهت تشخیص وجود پروتئین در نمونه

آزمایش بیوره جهت تشخیص وجود پروتئین در نمونه ،وجود پیوند های پپتیدی بین اسیدهای آمینه یکی از آزمایش های کتاب علوم دهم دبیرستان می باشد که در ادامه به چگونگی انجام آزمایش بیوره و تئوری آزمایش آن می پردازیم.
تئوری آزمایش :
از این آزمایش برای تشخیص وجود پروتئین در محلول استفاده می شود. به طور کلی از آنجایی که پروتئین ها هم گروه آمین و هم گروه کربوکسیل آنها اکثرا درگیر پیوند است، نمی توان از آزمایش های آمینو اسیدی برای تشخیص آنها  استفاده کرد. درصورتی که رنگ مایل به بنفش ایجاد شود نشان از وجود پروتئین و مثبت بودن آزمایش است.

اساس کار :
اساس روش بیوره این است که یون مس دو ظرفیتی (cu2) در محیط قلیایی با عامل آمین پیوند های پپتیدی، کمپلکس آبی رنگی ایجاد میکند که در طول موج 540nm جذب دارد. به دلیل اینکه مولکول بیوره نیز همین کمپلکس آبی را با cu2 تشکیل می دهد، این آزمایش بیوره نام دارد

نتیجه آزمایش : درست شدن حلقه ی بنفش رنگ بین دو فاز بیانگر و نشان دهنده ی وجود یون مس در پیوندهای پپتیدی است و وجود حداقل دو پیوند پپتیدی را در محلول مد نظر آزمایش را به اثبات رساند و هر چه تعداد پیوند ها پپتیدی بیشتر باشد ، شدت و غلظت رنگ بنفش بیشتر خواهد بود.

در حقیقت میان‌كنش پروتئین‌ها با سولفات مس در شرایط قلیایی، واكنش بیوره نامیده می‌شود. در محلول قلیایی، هر مولكولی كه دارای دو یا چند پیوند پپتیدی (پیوند بین دو اسید‌آمینه) مانند پروتئین‌ها باشد می‌تواند با یون‌های مس تشكیل كمپلكس داده و تولید رنگ ارغوانی تا بنفش نماید. شدت رنگ ایجاد شده بستگی به نوع پروتئین و مقدار آن دارد. از آزمایش بیوره هم به‌عنوان روشی هم برای تشخیص پروتئین (كیفی) و هم برای اندازه‌گیری مقدار پروتئین (كمی) استفاده می‌شود.

مثلا اضافه کردن معرف بیوره به لوله ی حاوی سفیده تخم مرغ ( پروتیین آلبومین ) به رنگ بنفش در می آید. سعی کنید این کار را آهسته و با احتیاط انجام داده تا منجر به واکنش تحریکی نشود و طوری که با ماده ی اولیه مخلوط نشود تا حضور حلقه بنفش رنگ را که نتیجه وجود پروتئین است را بین دو سطح به وجود آمده، اثبات کنیم بعد از این کار اگر لوله آزمایش را تکان دهیم کل محتوی لوله بنفش رنگ می شود . اگر در لوله آزمایش نیز به همان میزان شیر بریزیم به دلیل وجود پروتین کازیین رنگ بنفش ایجاد می شود ولی تغییر رنگ نسبت به سفیده تخم مرغ کمتر میباشد چون پروتیین کمتری نسبت به سفیده تخم مرغ دارد و یا اگر در یک لوله آزمایش دیگر آبمیوه بریزیم هیچ تغییر رنگ رخ نمی دهد چون هیچ پروتیینی وجود ندارد. این کار را می توان با مواد دیگر جهت تشخیص پروتیین انجام داد و با هم ازنظر کمی مقایسه کرد.

در تصویر ملاحظه می کنید که لوله سمت چپ نبود پروتیین و لوله سمت راست وجود پروتیین (تغییر رنگ از آبی به بنفش یا ارغوانی)